文章摘要:目的：探讨半夏泻心汤对胃癌来源外泌体（Exo）诱发人腹膜间皮细胞（HMrSV5）上皮间质转化（EMT）的影响。方法：制备半夏泻心汤含药血清，提取人胃癌NCI-N87细胞外泌体（NCI-N87-Exo），采用透射电镜及蛋白免疫印迹法（Western blot）进行鉴定，并用细胞膜红色荧光探针（Dil）标记。实验分为空白组、模型组、半夏泻心汤低、中、高剂量组(13.5，27，54 g·kg^-1)。空白组将HMrSV5细胞单独培养；模型组在HMrSV5中加入 100 μg 的NCI-N87-Exo；半夏泻心汤低、中、高剂量组在模型组的基础上分别加入10%的半夏泻心汤低、中、高剂量含药血清。激光共聚焦显微镜观察24 h、48 h及72 h时HMrSV5细胞对NCI-N87-Exo的摄取情况，72 h后观察HMrSV5细胞形态学的变化，Western blot检测HMrSV5细胞中E-钙黏附蛋白（E-cadherin）、细胞角蛋白19（CK19）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和弹性蛋白（Elastin）及转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达。结果：透射电镜观察到NCI-N87-Exo呈椭圆或碟状的囊泡结构，粒径介于40 ～ 80 nm，高表达Exo标志蛋白CD9、CD63，不表达钙网蛋白（Calreticulin），证实为NCI-N87-Exo。共培养24 h、48 h、72 h后，荧显微镜下均可观察到NCI-N87-Exo被HMrSV5细胞摄取，与时间呈正相关；半夏泻心汤可显著抑制HMrSV5细胞对NCI-N87-Exo的摄取，以半夏泻心汤中、高剂量组含药血清最为显著（P<0.05）。半夏泻心汤含药血清干预后HMrSV5细胞排列较为紧密，细胞间隙明显缩小，以半夏泻心汤含药血清大剂量组最为明显；Western blot显示，与空白组比较，半夏泻心汤含药血清干预后HMrSV5细胞E-cadherin、CK19蛋白表达显著升高，α-SMA、Elastin蛋白表达显著降低（P<0.05），同时TGF-β₁、p-Smad2/3蛋白表达显著降低（P<0.05），Smad2/3无明显变化。结论：NCI-N87-Exo能够被HMrSV5细胞摄取并诱发HMrSV5细胞EMT，半夏泻心汤能够阻抑HMrSV5细胞对NCI-N87-Exo的摄取，抑制NCI-N87-Exo诱发的HMrSV5细胞EMT，其作用机制与调控TGF-β₁/Smads信号通路有关。

文章关键词:胃癌,外泌体,人腹膜间皮细胞,上皮间质转化,半夏泻心汤,

项目基金:国家自然科学基金项目（81860813、81860782）,

论文作者:董俊刚 刘喜平 李沛清 王庆苗 朱中博 何玲 李永玉 王宇 

作者单位:甘肃中医药大学 

论文DOI: 10.13422/j.cnki.syfjx.20212126

论文分类号: R285.5

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