该实验仍然存在几点不足：①制备脱细胞支架常采用的化学方法和物理方法仍会对细胞外基质超微结构造成一定的损伤[36]，脱细胞过程也会改变原生组织中细胞外基质的结构和组成配比[37-38]；②该模型仍与体内肿瘤微环境然存在着一定的差异，该支架仅提供了细胞外基质，而血流动力学、成纤维细胞、免疫细胞、相关细胞因子等均未有涉及，而肿瘤微环境是一个构成复杂且动态变化的内环境[9，39-40]，所以后续可以进一步添加血管细胞、成纤维细胞、相关细胞因子等共培养改进造模方法，以期尽量接近于肿瘤微环境；③该模型仅观察了HCT116 细胞在支架上的形态表现，没有进一步探究物理结构对于肿瘤转移、侵袭在分子机制上的影响。

作者贡献：周京旭进行实验设计，实验实施为朱茗祺，实验评估为周京旭，资料收集为朱茗祺、陈泽仁、廖志晓，朱茗祺成文，周京旭、林丽珠审校。

经费支持：该文章未接受任何经费支持。

利益冲突：文章的全部作者声明，在课题研究和文章撰写过程中不存在利益冲突。

写作指南：该研究遵守国际医学期刊编辑委员会《学术研究实验与报告和医学期刊编辑与发表的推荐规范》。

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图 1 ｜猪结肠脱细胞前后的大体形态Figure 1 ｜Gross morphology of porcine colon prior to and following decellularization图注：A 为新鲜猪结肠浆膜层；B 为新鲜猪结肠黏膜层；C 为脱细胞后猪结肠浆膜层；D 为脱细胞后猪结肠黏膜层

图 2 ｜猪结肠脱细胞效果评价(×100)Figure 2 ｜Effect of decellularization of porcine colon (×100)图注：A、C 分别为新鲜猪结肠的苏木精-伊红染色与DAPI 染色，具有清晰的4 层结构，黏膜层分布大量的肠上皮细胞；B、D 分别为脱细胞猪结肠的苏木精-伊红染色与DAPI 染色，无细胞核及核碎片残留，完整保留了肠壁的4 层结构和胶原成分

图 3 ｜新鲜猪结肠及脱细胞猪结肠黏膜层微观结构(扫描电镜)Figure 3 ｜Microstructure of fresh porcine colon and decellularized colon mucosa (scanning electron microscope)图注：A、B 为新鲜猪结肠黏膜层，肠隐窝结构较疏松；C、D 为脱细胞猪结肠组织黏膜层，肠隐窝结构致密，表面形成大小、分布均匀的多孔结构

图 4 ｜人结肠HCT116 细胞在脱细胞猪结肠支架上的生长情况Figure 4 ｜Growth of human colon HCT116 cells on decellularized porcine colon scaffold图注：A-C 为培养1，3，7 d 人结肠HCT116 细胞在脱细胞猪结肠支架黏膜层表面的生长情况(活-死细胞染色，×40)，细胞能很好地聚集在支架黏膜层的孔隙内，逐渐向孔隙外蔓延生长，至第7 天时在黏膜层表面生长成片，未见到死细胞，且无细胞脱落；D、E 分别培养7 d 后人结肠HCT116 细胞在脱细胞猪结肠支架纵向生长的DAPI 染色(×100)与苏木精-伊红染色(×100)，部分细胞在孔隙内生长成团(箭头示)，并有部分细胞沿着孔隙继续向黏膜下层生长

图 5 ｜二维及三维培养模式下人结肠HCT116 细胞的形态(鬼笔环肽染色，×400)Figure 5 ｜Morphology of human colon HCT116 cells in two-dimensional culture and three-dimensional culture (phalloidin staining, ×400)图注：二维培养模式下，HCT116 细胞表现为短梭形片状，且无重叠生长表现；三维培养模式下，HCT116 细胞聚集在脱细胞猪结肠支架孔隙中，表现为成团聚集生长，聚集的HCT116 细胞表现得较为圆润(黄色箭头)，成团细胞周边生长的细胞呈纺锤形(白色箭头)

4 参考文献 References

[1] 吕东来.体外三维微环境增强胶质瘤细胞“干性”和诱导化疗耐药作用及其机制[D].重庆:第三军医大学,2016.

[2] ANTuNES J, GASPAR VM, FERREIRA L, et al. In-air production of 3D coculture tumor spheroid hydrogels for expedited drug screening. Acta Biomater. 2019;94:392-409.

[3] FRAHS SM, OXFORD JT, NEuMANN EE, et al. Extracellular Matrix Expression and Production in Fibroblast-Collagen Gels: Towards an In Vitro Model for Ligament Wound Healing. Ann Biomed Eng. 2018;46(11):1882-1895.

文章来源：《肿瘤药学》 网址: http://www.zlyxzz.cn/qikandaodu/2021/0222/666.html